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          豬游離血紅蛋白(F-Hb)ELISA試劑盒技術(shù)說(shuō)明
          更新時(shí)間:2023-06-02瀏覽:756次

            豬游離血紅蛋白(F-Hb)ELISA試劑盒技術(shù)說(shuō)明


            檢測(cè)范圍:0.6μg/ml -22μg/ml

            96T

            使用目的: 豬游離血紅蛋白(F-Hb)ELISA試劑盒用于測(cè)定豬全血樣本中游離血紅蛋白(F-Hb)含量。

            實(shí)驗(yàn)原理:本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測(cè)定標(biāo)本中豬游離血紅蛋白(F-Hb)水平。用純化的豬游離血 紅蛋白(F-Hb)抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入游離血紅蛋白 (F-Hb),再與 HRP 標(biāo)記的游離血紅蛋白(F-Hb)抗體結(jié)合,形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物, 經(jīng)過(guò)*洗滌后加底物 TMB 顯色。TMB 在 HRP 酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,并在酸的作用下 轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的游離血紅蛋白(F-Hb)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在 450nm 波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度(OD 值),通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中豬游離血紅蛋白(F-Hb)濃度。

          組成.png

            標(biāo)本要求

            1.標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取,提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行,提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。若不能馬上進(jìn)行試驗(yàn),可將標(biāo)本放于-20℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融

            2.不能檢測(cè)含 NaN3 的樣品,因 NaN3 抑制辣根過(guò)氧化物酶的(HRP)活性。

            操作步驟

          1. 標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋:本試劑盒提供原倍標(biāo)準(zhǔn)品一支,用戶可按照下列圖表在小試管中進(jìn)行稀釋。

            標(biāo)準(zhǔn)品稀釋步驟.png

            2. 加樣:分別設(shè)空白孔(空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑,其余各步操作相同)、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測(cè)樣品孔。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)確加樣 50μl,待測(cè)樣品孔中先加樣品稀釋液 40μl,然后再加待測(cè)樣品 10μl(樣品最終稀釋度為 5 倍)。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動(dòng)混勻。

            3. 溫育:用封板膜封板后置 37℃溫育 30 分鐘。

            4. 配液:將 30 倍濃縮洗滌液用蒸餾水 30 倍稀釋后備用

            5. 洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置 30 秒后棄去,如此重復(fù) 5 次,拍干。

            6. 加酶:每孔加入酶標(biāo)試劑 50μl,空白孔除外。

            7. 溫育:操作同 3。

            8. 洗滌:操作同 5。

            9. 顯色:每孔先加入顯色劑 A50μl,再加入顯色劑 B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色 10 分鐘.

            10. 終止:每孔加終止液 50μl,終止反應(yīng)(此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色)。

            11. 測(cè)定:以空白孔調(diào)零,450nm 波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的吸光度(OD 值)。 測(cè)定應(yīng)在加終止液后 15 分鐘以內(nèi)進(jìn)行。

            豬游離血紅蛋白操作程序總結(jié):

          操作程序總結(jié):.png

            計(jì)算

            以標(biāo)準(zhǔn)物的濃度為橫坐標(biāo),OD 值為縱坐標(biāo),在坐標(biāo)紙上繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線,根據(jù)樣品的 OD 值由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度;再乘以稀釋倍數(shù);或用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與 OD 值計(jì)算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的直線回歸方程式,將樣品的 OD 值代入方程式,計(jì)算出樣品濃度,再乘以稀釋倍數(shù),即為樣品的實(shí)際濃度。

            注意事項(xiàng)

            1.試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡 15-30 分鐘后方可使用,酶標(biāo)包被板開(kāi)封后如未用完,板條應(yīng)裝入密封袋中保存。

            2.濃洗滌液可能會(huì)有結(jié)晶析出,稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶,洗滌時(shí)不影響結(jié)果。

            3.各步加樣均應(yīng)使用加樣器,并經(jīng)常校對(duì)其準(zhǔn)確性,以避免試驗(yàn)誤差。一次加樣時(shí)間最好控制在 5 分鐘內(nèi),如標(biāo)本數(shù)量多,推薦使用排槍加樣。

            4. 請(qǐng)每次測(cè)定的同時(shí)做標(biāo)準(zhǔn)曲線,最好做復(fù)孔。如標(biāo)本中待測(cè)物質(zhì)含量過(guò)高(樣本 OD 值 大于標(biāo)準(zhǔn)品孔第一孔的 OD 值),請(qǐng)先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)(n 倍)后再測(cè)定,計(jì)算時(shí)請(qǐng)最后乘以總稀釋倍數(shù)(×n×5)。 5. 封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。

            6.底物請(qǐng)避光保存。

            7.嚴(yán)格按照說(shuō)明書的操作進(jìn)行,試驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn).

            8.所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。

            9.本試劑不同批號(hào)組分不得混用。

            保存條件及有效期

            1.試劑盒保存:;2-8℃。

            2.有效期:6 個(gè)月

            豬游離血紅蛋白(F-Hb)ELISA試劑盒本生一直視質(zhì)量控制為企業(yè)的生命,追求企業(yè)競(jìng)爭(zhēng)力的不斷提升。公司在經(jīng)營(yíng)中始終秉承:遵紀(jì)守法,嚴(yán)于律己,寬仁以待,敢于承擔(dān)的企業(yè)精神作為標(biāo)準(zhǔn),以過(guò)硬的質(zhì)量和優(yōu)良的服務(wù)來(lái)維護(hù)和拓展市場(chǎng),較大限度的滿足客戶的需求。與客戶的共贏,是我們的發(fā)展目標(biāo)。本生!您信任的合作伙伴。我們?cè)概c您真誠(chéng)合作,共創(chuàng)美好的未來(lái)。


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