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影響ELISA試劑盒測定成果的原因和解決辦法，有哪些?
ELISA是什么?
ELISA是酶聯免疫吸附測定法 (Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay , ELISA) 的簡稱。它是在免疫酶技術的基礎上發(fā)展起來的一種新型的免疫測定技術 。
酶聯免疫吸附試驗的標準程序，通常是把蛋白、抗體、或激素等(即抗原)直接或是以捕捉抗體(capture Ab)固定在固相載體上，再加入一級檢測抗體(primarydetection Ab)，形成一個抗原抗體的復合物。如果該抗體已經用酶(enzyme)標記了，即可用來直接測定抗原的量，若無，則可利用另一個酶標記的二級抗體來測定抗原的量。測定抗原量的方法是加入該酶的底質(substrate)，作用后產生出現的顏色深淺和樣本中的抗原量呈正比的關系，依此原理計算出樣本中的抗原總量或濃度。
ELISA試劑盒方法被廣泛應用于各種抗原和抗體測定，具有靈敏度高，操作簡略等優(yōu)點，但是在詳細實驗過程中影響要素較多，而且要按照嚴厲的闡明要求，在臨床檢驗中除正常反響外，有時常可見到一些錯誤成果(即假陽性或假陰性成果)。
影響ELISA測定錯誤成果的原因主要有：
①標本要素;
②試劑要素;
③操作要素。
一、類風濕因子
人血清中IgM、IgG型類風濕因子(RF)能夠與ELISA系統中的捕獲抗體及酶符號二抗的FC段直接結合，然后導致假陽性。
解決辦法:
1.用F(ab)2替代完好的IgG;
2.標本用聯有熱變性(63℃，10 min)IgG的固相吸附劑處理(將熱變性IgG加入到標本稀釋液中同樣有用);
3.檢測抗原時，能夠用2-巰基yi醇等加入到標本稀釋液中，使RF降解。
二、補體
ELISA系統中固相一抗和符號二抗過程中，抗體分子發(fā)作變構，其FC段的補體C1q分子結合位點被暴露出來，使C1q 能夠將二者連接起來，然后形成假陽性。
解決辦法:
1.用EDTA稀釋標本;
2.用53℃，10 min或56℃，30 min加熱血清使C1q滅活。
三、嗜異性抗體
人類血清中含有能與嚙齒類動物(如鼠等)Ig(s) 結合的天然嗜異性抗體，可將ELISA系統中一抗和二抗連接起來，也能形成假陽性。
解決辦法:
可在標本稀釋液中加入過量的動物Ig(s)，但加入量不足或亞類不同時無效。
四、嗜靶抗原的本身抗體
抗甲狀腺球蛋白、抗胰島素等嗜靶抗原的本身抗體，有時能與靶抗原結合形成復合物，在ELISA方法中均可干擾抗原抗體測定成果。
解決辦法:
測定前需用理化方法將其解離后再測定。
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